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復(fù)合酶微囊內(nèi)容物由包括脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶在內(nèi)的多種酶組成,主要用于多種原因造成的消化不良,如胰腺疾病引起的消化障礙或消化功能減退引起的消化不良癥等。其中脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶,具有對(duì)油-水界面的
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【目的】篩選鑒定1株產(chǎn)β-葡萄糖苷酶的菌株,克隆、表達(dá)該菌株中的β-葡萄糖苷酶基因,研究重組酶的酶學(xué)性質(zhì)并進(jìn)行分子改造?!痉椒ā吭谧匀唤缰胁杉翗?篩選到1株具有β-葡萄糖苷酶活性的菌株,對(duì)野生菌進(jìn)行16S rDNA鑒定,比對(duì)分析Gen Bank數(shù)據(jù)庫(kù)中與野生菌同屬的β-葡萄糖苷酶基因序列,設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物PCR擴(kuò)增基因保守區(qū);設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增目的基因,以pQE30為表達(dá)載體構(gòu)建重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá);采用鎳親和層析對(duì)重組酶進(jìn)行純化,研究其酶學(xué)性質(zhì);采用易錯(cuò)PCR和定點(diǎn)隨機(jī)突變相結(jié)合的方法對(duì)野生型β-葡萄糖苷酶進(jìn)行分子改造。【結(jié)果】一個(gè)來(lái)自于差異檸檬酸桿菌GXW-1的β-葡萄糖苷酶基因被克隆并在大腸桿菌中表達(dá)。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明該β-葡萄糖苷酶CBGL的最適溫度為45°C,最適p H為6.0,V_(max)值是(0.1704±0.0073)μmol/(mg·min),K_(cat)值為(0.2380±0.0102)/s。CBGL能水解α-pNPG、甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。對(duì)野生酶進(jìn)行分子改造,獲得V_(max)是野生酶2.54倍的突變體W147F。【結(jié)論】CBGL不僅具有β-1,4-糖苷鍵水解能力,還可能具有一定的α-糖苷鍵水解酶活性。此外,CBGL還能夠水解天然底物甜菊苷、黃豆苷和染料木苷。這些特性表明該β-葡萄糖苷酶在理論研究及在工業(yè)中有一定的應(yīng)用價(jià)值。
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