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本文建立了適合中國菊花種質(zhì)資源長期保存的玻璃化超低溫保存技術(shù)體系。在4℃下,把1~2mm的菊花莖尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)2~3d,用預(yù)處理液在25℃下處理30min,再用玻璃化試劑PVS2在冰浴條件下處理15min,換新鮮的PVS2試劑并迅速投入液氮。液氮保存24h后,40℃水浴解凍2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液體培養(yǎng)基洗滌20min,濾紙吸干后接種到恢復(fù)培養(yǎng)基中,在25℃條件下弱光培養(yǎng)1~3d轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng),2周后成活率可達(dá)86%以上,成活的莖尖均可再生。
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以菊花組培苗為試材,對菊花玻璃化苗和正常苗的生理特性進(jìn)行比較。測定了組織含水量、葉綠素、可溶性糖、蔗糖、可溶性蛋白5個指標(biāo)。玻璃化苗的組織含水量、可溶性糖含量高于正常苗,葉綠素a、葉綠素b、蔗糖、可溶性蛋白含量明顯低于正常苗。說明玻璃化苗與正常苗在光合能力、蛋白質(zhì)合成和糖代謝方面顯著不同。
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