電化學(xué)高效液相分析儀

流速范圍：0.001-9.999mL/min，0-40MPa。

高效液相層析高壓

液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達(dá)150～3.5萬KPa。

高效液相層析高速

流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達(dá)1～10ml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜法少得多，一般少于 1h 。

高效液相層析高效

近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。

高效液相層析高靈敏度

高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達(dá)10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升。

高效液相層析適應(yīng)范圍寬

氣相色譜法與高效液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點，但是受技術(shù)條件的限制，沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大（大于 400 以上）的有機(jī)物（這些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的 75% ～ 80% ）原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離、分析。 據(jù)統(tǒng)計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%，而能用液相色譜分析的約占70～80%。

高效液相色譜按其固定相的性質(zhì)可分為高效凝膠色譜、疏水性高效液相色譜、反相高效液相色譜、高效離子交換液相色譜、高效親和液相色譜以及高效聚焦液相色譜等類型。用不同類型的高效液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對應(yīng)的普通液相層析的原理相似。其不同之處是高效液相色譜靈敏、快速、分辨率高、重復(fù)性好，且須在色譜儀中進(jìn)行。

反相高效液相色譜定義

反相高效液相色譜是由非極性固定相和極性流動相所組成的液相色譜體系，它正好與由極性固定相和弱極性流動相所組成的液相色譜體系（正相色譜）相反。RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基鍵合硅膠，典型的流動相是甲醇和乙腈。RP-HPLC是當(dāng)今液相色譜的最主要的分離模式，幾乎可用于所有能溶于極性或弱極性溶劑中的有機(jī)物的分離。 反相色譜法適于分離非極性、極性或離子型化合物，大部分的分析任務(wù)皆由反相色譜法完成。

反相高效液相色譜是化學(xué)鍵合相色譜法的一種?；瘜W(xué)鍵合相色譜法是由液液色譜法發(fā)展起來的，是為了解決在分離過程中，機(jī)械吸附在載體上的固體液的流失問題而發(fā)展出來的一種新方法。鍵合相色譜法通過將不同的有機(jī)官能團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)共價鍵合到硅膠載體表面的游離烴基上，而生成化學(xué)鍵合固定相，化學(xué)鍵合固定相對各種極性溶劑都有良好的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。由它制備的色譜主柱效高、使用壽命長、重現(xiàn)性好，幾乎對各種類型的有機(jī)化合物都呈現(xiàn)良好的選擇性，并可用于梯度洗脫操作，消除了分配色譜法的缺點。

根據(jù)鍵合固定相和流動相相對極性的強(qiáng)弱，可將鍵合色譜法分為正相鍵合色譜法和反相鍵合色譜法。反相鍵合色譜法即反相高效液相色譜。在正相鍵合色譜法中，鍵合固定相的極性大于流動相的極性，適用于分離油溶性或水溶性的極性和強(qiáng)極性化合物。在反相鍵合相色譜法中，鍵合固定相的極性小于流動相的極性適用于分離非極性、極性或離子型化合物，其應(yīng)用范圍也比正相鍵合相色譜法更廣泛。

反相高效液相色譜原理

在反相鍵合相色譜法中使用的是非極性鍵合固定相。它是將全多孔（或薄殼）微粒硅膠載體，經(jīng)酸活化處理后與含輕基鏈(C4、C8、C18)或苯基的硅烷化試劑反應(yīng)，生成表面具有烷基或苯基的非極性固定相。如共價結(jié)合到載體上的直鏈碳?xì)浠衔镎粱?。關(guān)于反相色譜的分離機(jī)理，吸附色譜的作用機(jī)制認(rèn)為溶質(zhì)在固定相上的保留主要是疏水作用，在高效液相色譜中又被稱為疏溶劑作用。根據(jù)疏溶劑理論，當(dāng)溶質(zhì)分子進(jìn)入極性流動相后，即占據(jù)流動相中相應(yīng)的空間，而排擠一部分溶劑分子。當(dāng)溶質(zhì)分子被流動相推動與固定相接觸時，溶質(zhì)分子的非極性部分或非極性因子會將非極性固定相上附著的溶劑膜排擠開，而直接與非極性固定相上的烷基官能團(tuán)相結(jié)合（吸附）形成締合絡(luò)合物，構(gòu)成單分子吸附層。這種疏溶劑的吸附作用是可逆的，當(dāng)流動相極性減少時，這種疏溶劑斥力下降，會發(fā)生解締，并將溶質(zhì)分子解放而被洗脫下來。

反相高效液相色譜影響溶質(zhì)保留值的三個因素

烷基鍵合固定相對每種溶質(zhì)分子締合作用和解締作用能力之差，就決定了溶質(zhì)分子在色譜過程的保留值。以下簡述影響溶質(zhì)保留值的三個因素:

1）溶質(zhì)分子結(jié)構(gòu)

在反相鍵合相色譜法中，溶質(zhì)的分離是以它們的疏水結(jié)構(gòu)差異為依據(jù)的，溶質(zhì)的極性越弱，疏水性也強(qiáng)，保留值越大。根據(jù)疏溶劑理論，溶質(zhì)的保留值與其分子中非極性部分的總表面積有關(guān)，其與烷基鍵合固定相結(jié)出的面積越大，保留值越大。

2) 烷基鍵合固定相的特性

烷基鍵合固定相的作用在于提供非極性作用表面，因此鍵合到硅膠表面的烷基數(shù)量就決定著溶質(zhì)容量因子的大小。烷基的疏水特性隨碳鏈的加長而增加，溶質(zhì)的保留值也隨著烷基碳鏈長度的增加而增大。隨著烷基碳鏈的增長,增加了鍵合相的非極性作用的表面積，其不僅影響溶質(zhì)的保留值，還影響色譜柱的選擇性，即隨烷基碳鏈的加長其對溶質(zhì)分離的選擇性也增大。

3) 流動相性質(zhì)

流動相的表面張力愈大，介電常數(shù)愈大，其極性越強(qiáng)，此時溶質(zhì)與烷基鍵合相得締合能力越強(qiáng)，流動相的洗脫強(qiáng)度弱，導(dǎo)致溶質(zhì)的保留值越大。