生活垃圾滲瀝水五日生化需氧量(BOD)的測定稀釋與培養(yǎng)法簡介

水五日生化需氧量(BOD5)的測定

1.1 理解BOD的含義及測定條件;

1.2 了解水樣預(yù)處理的道理與預(yù)處理方法。

生物化學(xué)需氧量(BOD)定義為:在規(guī)定的條件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物質(zhì)，特別是有機物所進行的生物化學(xué)過程所消耗的溶解氧量。該過程進行的時間很長，如在20℃培養(yǎng)條件下，全過程需100天，根據(jù)目前國際統(tǒng)一規(guī)定，在20±1℃的溫度下，培養(yǎng)五天后測出的結(jié)果，稱為五日生化需氧量，記為BOD5，其單位用質(zhì)量濃度mg/L表示。

對于一般生活污水和工業(yè)廢水，雖然含較多有機物，如果樣品含有足夠的微生物和具有足夠氧氣，就可以將樣品直接進行測定，但為了保證微生物生長的需要，需加入一定量的無機營養(yǎng)鹽(磷酸鹽、鈣、鎂和鐵鹽)。

某些不含或少含微生物的工業(yè)廢水、酸堿度高的廢水、高溫或氯化殺菌處理的廢水等，測定前應(yīng)接入可以分解水中有機物的微生物，這種方法稱為接種。對于一些廢水中存在著難被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有機物或含有劇毒物質(zhì)時，可以將水樣適當(dāng)稀釋，并用馴化后含有適應(yīng)性微生物的接種水進行接種。

一般檢測水質(zhì)的BOD5只包括含碳有機物質(zhì)氧化的耗氧量和少量無機還原性物質(zhì)的耗氧量。由于許多

二級生化處理的出水和受污染時間較長的水體中，往往含有大量硝化微生物。這些微 生物達到一定數(shù)量就可以產(chǎn)生硝化作用的生化過程。為了抑制硝化作用的耗氧量，應(yīng)加入適量的硝化抑制劑。

BOD5為2-1000mg/L水樣，超過1000mg/L的水樣，應(yīng)適當(dāng)稀釋。

BOD分析儀是高智能化在線連續(xù)監(jiān)測儀。使用的玻璃儀器皿在實驗前應(yīng)認(rèn)真清洗，防止油污、沾塵。玻璃器皿干燥后方能使用。

BDO-200A型中文在線溶氧儀是我公司生產(chǎn)高智能化在線連續(xù)監(jiān)測儀。可以配極譜式電極，自動實現(xiàn)從ppb級到ppm級的寬范圍測量，是檢測鍋爐給水、凝結(jié)水、環(huán)保污水等行業(yè)的液體中氧含量測量的專用儀器。其具有響應(yīng)快、穩(wěn)定、可靠、使用費用低等特點，適合火力發(fā)電廠大量使用。

常用實驗室設(shè)備如下:

4.1 生化培養(yǎng)箱溫度控制在20±l℃，可連續(xù)無故障運行。

4.2 充氧設(shè)備充氧動力常采用無油空氣壓縮機(或隔膜泵、或氧氣瓶、或真空泵)。充氧流程可分為正壓、負(fù)壓充氧兩種流程。

4.3 BOD培養(yǎng)瓶:容積550±1mL。

4.4 樣品運輸貯藏箱:溫度保持0~4℃。

4.5 250mL溶解氧瓶或具塞試劑瓶2~6個。

4.6 50mL滴定管2支。

4.7 1mL移液管3支，25mL、100mL移液管各1支。

4.8 10mL、100mL量筒各1個。

4.9 250mL碘量瓶2個。

采用分析純試劑。實驗用水采用重蒸蒸餾水。

5.1硫酸錳溶液

將MnSO4·4H2O 480g或MnSO4·2H2O 400g溶于蒸餾水中，過濾后稀釋成100mL。 (此溶液中不能含有高價錳，試驗方法是取少量此溶液加入碘化鉀及稀硫酸后溶液不能變成黃色，如變成黃色表示有少量碘析出，即表示溶液中含有高價錳)。

MnO+2I-+6H+=I2+Mn2++3H2O ?23

5.2堿性碘化鉀溶液

溶解500g氫氧化鈉于300-400mL蒸餾水中，冷至室溫。另外溶解300g碘化鉀于200mL蒸餾水中，慢慢加入已冷卻的氫氧化鈉溶液，搖勻后用蒸餾水稀釋至1000mL(強堿性溶液腐蝕性很大，使用時注意勿濺在皮膚或衣服上)，如有沉淀，則放置過夜取上清液，貯藏于塑料瓶或棕色試劑瓶中(用棕色試劑瓶時要用橡膠瓶塞)。

5.3 濃硫酸

比重1.84，強酸腐蝕性很大，使用注意勿濺在皮膚或衣服上。

5.4 1%淀粉指示液

稱取2g可溶性淀粉，溶于少量蒸餾水中，用玻璃棒調(diào)成糊狀:慢慢加入(邊加邊攪拌)剛煮沸的200mL蒸餾水中，冷卻后加入0.25g水楊酸或0.8g氯化鋅ZnCl2防腐劑。此溶液遇碘應(yīng)變?yōu)樗{(lán)色，如變成紫色表示已有部分變質(zhì)，要重新配制。

5.5 (1+1)硫酸溶液

將濃硫酸(比重1.84)與水等體積混合。

5.6 2 mol/L(1/2 H2SO4)

5.7鹽溶液

下述溶液至少可穩(wěn)定一個月，應(yīng)貯存在玻璃瓶內(nèi)，置于暗處。一旦發(fā)現(xiàn)有生物滋長跡象，則應(yīng)棄去不用。

5.7.1 磷酸鹽:緩沖溶液。

將8.5g磷酸二氫鉀(KH2PO4)、21.75g磷酸氫二鉀(K2HPO4)、33.4g七水磷酸氫二鈉(NaH2PO4·7H2O)、和1.7g氯化銨(NH4Cl)溶于500mL水中，西是指1000mL。

此緩沖溶液的pH應(yīng)為7.2。

5.7.2 七水硫酸鎂:22.5g/L溶液

將22.5g七水硫酸鎂(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀釋至1000mL并混合均勻。

5.7.3 氯化鈣:27.5g/L溶液

將27.5g無水氯化鈣(CaCl2)(若用水合氯化鈣，要取相當(dāng)?shù)牧?溶于水，稀釋至1000mL并混合均勻。

5.7.4:0.25g /L溶液

將0.25g六水氯化鐵(Ⅲ)(FeCl3·H2O)溶解于水中，稀釋至1000mL并混合均勻。

5.8 硫代硫酸鈉溶液C(Na2S2O3)=0.025mol/L

稱取6.2g硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O)溶于煮沸放冷的蒸餾水中，加入0.2g碳酸鈉，用水稀釋至1000mL。貯于棕色瓶中，使用前用重鉻酸鉀，C(1/6K2Cr2O7)=0.0250mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定，標(biāo)定方法如下。

于250mL碘重瓶中，加入l00mL蒸餾水和1g碘化鉀，加入10.00mL 0.0250 mo1/L重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，5mL 2 mol/L(1/2 H2SO4)硫酸溶液(5.6)，密塞，搖勻，于暗處靜置5 min后，用待標(biāo)定的硫代硫酸鈉溶液滴定至溶液呈淡黃色，加入1 mL淀粉溶液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好褪盡為止，記錄用量。

標(biāo)定反應(yīng):K2Cr2O7+6KI+7H2SO4=Cr2(SO4)3+312+4K2SO4+7H2O

(硫酸鉻，綠色)

I2+2Na2S2O3=2NaI+Na2S4O6

(連四硫酸鈉，無色)

C=10.00×0.0250/V

式中 C--硫酸鈉溶液濃度(mol/L)

V--硫代硫酸鈉溶液消耗量(mL)

5.9 氫氧化鈉，0.5mol/L

5.10 鹽酸，0.5mol/L

5.11 稀釋水

在5-20L玻璃內(nèi)瓶裝入一定量的純水曝氣2-8h，使稀釋水的溶解氧接近飽和;曝氣后瓶口蓋上兩層干凈紗布，置于20℃培養(yǎng)箱中放置數(shù)小時，使水中溶解氧含量不少于8mg/L。臨用前每升水中加入四種營養(yǎng)鹽溶液(5.7.1)、(5.7.2)、(5.7.3)、(5.7.4)各lmL并混合均勻。稀釋水的pH值為7.2，應(yīng)在8h內(nèi)使用完。

5.12 接種水

如被檢驗樣品本身不含有足夠的適應(yīng)性微生物，應(yīng)采取下述方法獲得接種水。接種溫度應(yīng)在20±l℃。

5.12.1 城市污水，一般采用住宅區(qū)生活污水，過濾后在20℃培養(yǎng)箱內(nèi)放置一晝夜，取上清液作為接種水。

5.12.2 待測樣品經(jīng)生化處理構(gòu)筑物的出水處的出水。

5.12.3 當(dāng)工業(yè)廢水中含有難降解有機物時，取該工業(yè)廢水排放口下游3-8Km 處的水作為做接種水;如無此種水源采用馴化菌種的方法在實驗室培養(yǎng)含有適應(yīng)于待測樣品的接種水，建議采用如下方法:取中和或適當(dāng)稀釋后的該水樣進行連續(xù)曝氣，每天加少量新鮮水樣。同時加入適量表層土壤、花園土壤或生活污水，使能適應(yīng)水樣的微生物大量繁殖。當(dāng)水中出現(xiàn)大量絮狀物，或分析其化學(xué)需氧量的降低值出現(xiàn)突變時，表明適應(yīng)的微生物已經(jīng)繁殖，可用做接種水。一般馴化過程需要3-8d。

5.13 接種的稀釋水

根據(jù)需要和接種水的來源，向每升稀釋水(5.11)中加入1.0~5.0mL接種水(5.12)中的一種。

以接種的稀釋水的5天(20℃)耗氧量應(yīng)在0.3~1.0mg/L之間。

6.1 實驗前準(zhǔn)備工作

6.1.1實驗前8h將生化培養(yǎng)箱接通電源，并使溫度控制在20℃下正常運行。

6.1.2將實驗用的稀釋水、接種水和接種的稀釋水放入培養(yǎng)箱內(nèi)恒溫備選用。

6.2水樣預(yù)處理

6.2.1水樣的pH值不在6.5~7.5之間時;先做單獨試驗，確定需要的鹽酸(5.10)或氫氧化鈉溶液(5.9)

體積，再中和樣品，不管有無沉淀形成。當(dāng)水樣的酸度或堿度很高，可改用高濃的堿或酸進行中和，確保用量不少過水樣體積的0.5%。

6.2.2含有少量游離氯的水樣，一般放置1-2h后，游離氯即可消失。對于游離氯在短時間內(nèi)不能消失的水樣，可加入適量的亞硫酸鈉溶液，以除去游離氯。

6.2.3從水溫較低的水體中或富營養(yǎng)化的湖泊中采集的水樣，應(yīng)迅速升溫至20℃左右，以趕出水樣中過飽和的溶解氧。否則會造成分析結(jié)果偏低。

從水溫較高的水體中或廢水排放口取樣，應(yīng)迅速使其冷卻至20℃左右，否則會造成分析結(jié)果偏高。

6.2.4若待測水樣沒有微生物或微生物活性不足時，都要對樣品進行接種。諸如以下幾種工業(yè)廢水:

a、未經(jīng)生化處理過的工業(yè)廢水;

b、高溫高壓或經(jīng)衛(wèi)生殺菌的廢水，特別要注意食品加工工業(yè)的廢水和醫(yī)院生活污水;

c、強酸強堿性的工業(yè)廢水;

d、高BOD5值的工業(yè)廢水;

e、含銅、鋅、鉛、砷、鎘、鉻、氰等有毒物質(zhì)的工業(yè)廢水。

以上的工業(yè)廢水都需采用具有足夠微生物。

7.1 不經(jīng)稀釋水樣的測定

①溶解氧含量較高、有機物含量較少的地表水，可不經(jīng)稀釋而直接以虹吸法將約20℃的混勻水樣轉(zhuǎn)移入兩個溶解氧瓶內(nèi)，轉(zhuǎn)移過程應(yīng)注意不使產(chǎn)生氣泡。以同樣的操作使兩個溶解氧瓶充滿水樣后溢出少許，加塞。瓶內(nèi)不應(yīng)留有氣泡。

②其中一瓶隨即測定溶解氧，另一瓶的瓶口進行水封后，放入培養(yǎng)箱中，在20培養(yǎng)5天。在培養(yǎng)過程中注意添加封口水。

③從開始放入培養(yǎng)箱算起，經(jīng)過5晝夜后，棄去封口水，測定剩余的溶解氧。

7.2 需經(jīng)稀釋水樣的測定

7.2.1 稀釋倍數(shù)的確定

根據(jù)實踐經(jīng)驗，提出下述計算方法，供稀釋時參考。

7.2.1.1地表水

由測得的高錳酸鹽指數(shù)與一定的系數(shù)的乘積，即求的稀釋倍數(shù)。高錳酸鹽指數(shù)與系數(shù)的關(guān)系見表2-3。

表2-3 由高錳酸鹽指數(shù)與系數(shù)的關(guān)系

高錳酸鹽指數(shù)(mg/L)

高錳酸鹽指數(shù)(mg/L)

系數(shù)

<5

-

10~20

0.4、0.6

5~10

0.2、0.3

>20

0.5、0.7、1.0

7.2.1.2工業(yè)廢水

由重鉻酸鉀法測得的COD值來確定，同程需作單個稀釋比。

使用稀釋水時，由COD值分別乘以系數(shù)0.075、0.15、0.225，即獲得三個稀釋倍數(shù)。

使用接種稀釋水時，則分別乘以系數(shù)0.075、0.15、0.25即獲得三個稀釋倍數(shù)。

7.2.2 稀釋操作

7.2.2.1 一般稀釋法:

按照選定的稀釋比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀釋水(或接種稀釋水)于1000mL量筒中，加入需要量的均勻水樣，再加入稀釋水(或接種稀釋水)至800mL，用帶膠板的玻棒小心上下攪勻。攪拌時勿使攪棒的膠板露出水面，防止產(chǎn)生氣泡。

按照(7.1)相同的步驟操作，測定培養(yǎng)5天前后的溶解氧。

另取兩個溶解氧瓶，用虹吸法裝滿稀釋水(或接種稀釋水)作為空白試驗，測定培養(yǎng)5天前后的溶解氧。

7.2.2.2 直接稀釋法

直接稀釋法是在溶解氧瓶內(nèi)直接稀釋。在已知兩個容積相同(其差<1mL)的溶解氧瓶內(nèi)，用虹吸法加入部分稀釋水(或接種稀釋水)，再加入根據(jù)瓶容積和稀釋比例計算出來的水樣量，然后用稀釋水(或接種稀釋水)使剛好充滿，加塞，勿留氣泡于瓶內(nèi)。

7.3溶解氧的測定:

溶解氧的測定方法用碘量法(通常用疊氮化鈉改良法)，詳見本書第二章《實驗六水溶解氧(DO)的測定》

8.1不經(jīng)稀釋直接培養(yǎng)的水樣

BODs = DO1-DO2

BODs--水樣的BOD5值，mg/L

DO1:水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mg/L

DO2:水樣在培養(yǎng)五天后的溶解氧濃度，mg/L

8.2 經(jīng)稀釋后培養(yǎng)的水樣2121215)()(ffBBCCBOD?????

C1--水樣在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mg/L

C2--水樣在培養(yǎng)五天后的溶解氧濃度，mg/L

B1--稀釋水(或接種稀釋水)在培養(yǎng)前的溶解氧濃度，mg/L

B2--稀釋水(或接種稀釋水)在培養(yǎng)五天后的溶解氧濃度，mg/L

f1--稀釋水(或接種稀釋水)在培養(yǎng)液中所占比例

f2--水樣在培養(yǎng)液中所占比例1

9.1 根據(jù)廢水濃度高低及毒性大小確定使用稀釋水、接種水還是稀釋接種水，若稀釋比大于100，將分兩步或幾步進行稀釋。

9.2 培養(yǎng)時要注意避光，防止藻類生長影響測定結(jié)果。

9.3 其他注意事項參見本書第二章《實驗六水溶解氧(DO)的測定》中(7.2~7.6)。

稀釋與接種法(HJ 505-2009)

本標(biāo)準(zhǔn)參照采用國際標(biāo)準(zhǔn)ISO5815--1983，本國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定采用稀釋與接種法作為測定水中生化需氧量的標(biāo)準(zhǔn)方法，這是一種經(jīng)驗性的常規(guī)方法。

適用范圍:本方法適用于BOD5或等于2mg/L并且不超過6000mg/L的水樣。BOD5大于6000mg/L的水樣仍可用本方法，但由于稀釋會造成誤差，有必要要求對測定結(jié)果做慎重的說明。本試驗得到的結(jié)果是生物化學(xué)和化學(xué)作用共同產(chǎn)生的結(jié)果，它們不象單一的、有明確定義的化學(xué)過程那樣具有嚴(yán)格和明確的特性，但是它能提供用于評價各種水樣質(zhì)量的指標(biāo)。本試驗的結(jié)果可能會被水中存在的某些物質(zhì)所干擾，那些對微生物有毒的物質(zhì)，如殺菌劑、有毒金屬或游離氯等，會抑制生化作用。水中的藻類或硝化微生物也可能造成虛假的偏高結(jié)果。

原理:將水樣注滿培養(yǎng)瓶，塞好后應(yīng)不透氣，將瓶置于恒溫條件下培養(yǎng)5天。培養(yǎng)前后分別測定溶解氧濃度，由兩者的差值可算出每升水消耗掉氧的質(zhì)量，即BOD5值。由于多數(shù)水樣中含有較多的需氧物質(zhì)，其需氧量往往超過水中可利用的溶解氧(DO)量，因此在培養(yǎng)前需對水樣進行稀釋，使培養(yǎng)后剩余的溶解氧(DO)符合規(guī)定。一般水質(zhì)檢驗所測BOD5只包括含碳物質(zhì)的耗氧量和無機還原性物質(zhì)的耗氧量。有時需要分別測定含碳物質(zhì)耗氧量和硝化作用的耗氧量。常用的區(qū)別含碳和氮的硝化耗氧的方法是向培養(yǎng)瓶中投加硝化抑制劑，加入適量硝化抑制劑后，所測出的耗氧量既為含碳物質(zhì)的耗氧量。在5天培養(yǎng)時間內(nèi)，硝化作用的耗氧量取決于是否存在足夠數(shù)量的能進行此種氧化作用的微生物，原污水或初級處理的出水中這種微生物的數(shù)量不足，不能氧化顯著量的還原性氮，而許多二級生化處理的出水和受污染較久的水體中，往往含有大量硝化微生物，因此測定這種水樣時應(yīng)抑制其硝化反應(yīng)。在測定BOD5的同時，需要葡萄糖和谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液完成驗證試驗。

試劑:分析時，只采用公認(rèn)的分析純試劑和蒸餾水或同等純度的水(在全玻璃裝置中蒸餾的水或去離子水)，水中含銅不應(yīng)高于0.01mg/L，并不應(yīng)有氯、氯氨、可性堿、有機物和酸類。

1接種水

如試驗樣品本身不含有足夠的合適性微生物，應(yīng)采用下述方法之一，以獲得接種水:

a.城市廢水，取自污水管或取自沒有明顯工業(yè)污染的住宅區(qū)污水管。

這種水在使用前，應(yīng)傾出上清夜備用。

b.在1L水中加入100g花園土壤，混合并靜置10min。取10ml上清夜用水稀釋至1L。

c.含有城市污水的河水或湖水。

d.污水處理廠出水。

e.當(dāng)待分析水樣為含難降解物質(zhì)的工業(yè)廢水時，取自待分析水排放口下游約3-8km的水或所含微生物適宜于待分析水并經(jīng)實驗室培養(yǎng)過的水

2鹽酸液

下述溶液至少可穩(wěn)定一個月，應(yīng)貯存在玻璃瓶內(nèi)，置于暗處。一旦發(fā)現(xiàn)有生物滋長跡象，則應(yīng)棄去不用。

2.1磷酸鹽:緩沖溶液。

降8.5g磷酸二氫鉀(KH2PO4)、21.75g磷酸氫二鉀(K2HPO4)、33.4g七水磷酸氫二鈉(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化銨(NH4CI)溶于約500ml水中，稀釋至1000ml并混合均勻。

此緩沖溶液的pH應(yīng)為7.2。

2.2七水硫酸鎂:22.5g/L溶液。

將22.5g的七水硫酸鎂(MgSO4·7H2O)溶于水中，稀釋至1000ml并混合均勻。

2.3氯化鈣:27.5g/L溶液。

將27.5g的無水氯化鈣(CaCl2)(若用水合氯化鈣，要取相當(dāng)?shù)牧?溶于水，稀釋至1000ml并混合均勻。

2.4六水氯化鐵(FeCl3·6H2O):0.25g/L溶液。

將0.25g六水氯化鐵(FeCl3·6H2O)溶解于水中，稀釋至1000ml并混合均勻。

3稀釋水

取每種鹽溶液各1ml，加入約500ml水中，然后稀釋至1000m并混合均勻，將此溶液置于20oC下恒溫，曝氣1h以上，采取各種措施，使其不受污染，特別是不被有機物質(zhì)、氧化或還原性物質(zhì)或金屬污染，確保溶解氧濃度不低于8mg/L。此溶液的五日生化需氧量不得超過0.2mg/L。此溶液應(yīng)在8h內(nèi)使用。

4接種的稀釋水

根據(jù)需要和接種水的來源，向每升稀釋水中加1.0-5.0ml接種水，將已接種的稀釋水在約20oC下保存，8h后盡早應(yīng)用。已接種的稀釋水的5天(20oC)耗氧量應(yīng)在每升0.3-1.0mg之間。

5鹽酸(HCl)溶液:0.5g/L。

6氫氧化鈉(NaOH)溶液:20g/L。

7亞硫酸鈉(NaSO3)溶液:1.575g/L，此溶液不穩(wěn)定，需每天配制。

8葡萄糖–谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

將一些無水葡萄糖(C6H12O6)和一些谷氨酸(HOOC–CH2–CH2–CHNH2–COOH)在103oC下干燥1h，每種稱量150±1mg，溶于蒸餾水中，稀釋至1000ml并混合均勻。此溶液于臨用前配制。

儀器

使用的玻璃器皿要認(rèn)真清洗，不能吸有毒的或生物可解物的化合物，并防止沾污。常用的實驗室設(shè)備如下:

1培養(yǎng)瓶:細(xì)口瓶的容量在250-300ml之間，帶有磨口玻璃塞，并具有供水封用的鐘型口，最好是直尖的。

2培養(yǎng)箱:能控制在20±1oC。

3測定溶解氧儀器。

4用于樣品運輸和貯藏的冷藏手段(0-4oC)。

5稀釋容器:帶塞玻璃瓶，刻度精確到毫升，其容積大小取決于使用稀釋水樣品的體積。

樣品的貯存

樣品需充滿并密封于瓶中，置于2-5oC保存到進行分析時。一般應(yīng)在采樣后6h內(nèi)進行檢驗。若需遠(yuǎn)距離轉(zhuǎn)運，在任何情況下貯存皆不得超過24h。樣品也可以深度冷凍貯存。

操作步驟

1樣品預(yù)處理

1.1樣品的中和

如果樣品的PH不在6-8之間，先做單獨試驗，確定需要用的鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液的體積，再稱樣品，不管有無沉淀形成。

1.2含游離氯或結(jié)合氯的樣品

加入所需體積的氫氧化鈉溶液，使樣品中自由氯和結(jié)合氯失效，注意避免過量。

2試驗水樣的準(zhǔn)備

將試驗樣品溫度升至約20oC，然后再半充滿的容器內(nèi)搖動樣品，以便消除可能存在的過飽和氧。

將已知體積樣品置于稀釋容器中，用稀釋水或接種稀釋水稀釋，輕輕地中和，避免夾雜空氣泡。

BOD自動測定儀OxiTop-IS6

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