文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程

地方標(biāo)準(zhǔn)《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》（DB15/T 1939-2020）規(guī)定了文冠果組織培養(yǎng)的術(shù)語(yǔ)和定義、環(huán)境及器具滅菌、培養(yǎng)基配制、外植體及其滅菌、初代培養(yǎng)、增殖繼代培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、組培瓶苗煉苗移栽和大田培育等基本內(nèi)容及技術(shù)要求。該標(biāo)準(zhǔn)適用于文冠果組織培養(yǎng)育苗。

參考資料：

文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程制定背景

文冠果是異株異花授粉植物，其后代會(huì)出現(xiàn)分離，無(wú)法保持母本的優(yōu)良特性，因此，生產(chǎn)上都采用無(wú)性繁殖的方法來(lái)繁殖文冠果，以保持其優(yōu)良品種的特性。文冠果屬于極難生根的樹(shù)種，用枝條扦插的生根率較低，兒文冠果嫁接技術(shù)研究較少，還存在嫁接不親和嫁接后代出現(xiàn)變異等問(wèn)題尚未得到解決。因此，探尋一種高效的無(wú)性繁殖方法將有利于文冠果優(yōu)良品種選育和優(yōu)良性狀保持，以及資源的開(kāi)發(fā)利用和進(jìn)一步的深入研究。

截止2019年，無(wú)論是在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)還是林業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中，僅對(duì)文冠果的播種繁殖育苗和造林等技術(shù)制定了相關(guān)規(guī)程和標(biāo)準(zhǔn)，文冠果無(wú)性繁殖方面的標(biāo)準(zhǔn)尚屬空白。因此，制定了地方標(biāo)準(zhǔn)《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》（DB15/T 1939-2020）。

文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程編制進(jìn)程

• 標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃

2019年3月，內(nèi)蒙古自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院提出了《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)的立項(xiàng)申請(qǐng)。該標(biāo)準(zhǔn)由內(nèi)蒙古自治區(qū)林業(yè)和草原局提出并歸口。

• 起草階段

2019年6月，起草單位接到內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)管局下達(dá)的《2019年第1批內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知（內(nèi)市監(jiān)標(biāo)準(zhǔn)字〔2019〕170號(hào)）》后，成立了《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》起草小組，配備了具有編制標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)驗(yàn)，對(duì)文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)有系統(tǒng)研究的技術(shù)骨干，開(kāi)始進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)編制工作。起草小組查閱了標(biāo)準(zhǔn)制定的規(guī)范性文件，確定了需參考的現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)，收集了相關(guān)研究資料和文獻(xiàn)資料。在此基礎(chǔ)上，起草小組有針對(duì)性地進(jìn)行了深入調(diào)研，于2019年11月完成了《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》的編制草案。于2019年12月組織專家對(duì)草案進(jìn)行研討，形成了標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿和編制說(shuō)明。

• 發(fā)布實(shí)施

2020年7月30日，地方標(biāo)準(zhǔn)《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》（DB15/T 1939-2020）由中華人民共和國(guó)內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布。

2020年8月30日，地方標(biāo)準(zhǔn)《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》（DB15/T 1939-2020）實(shí)施。

文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程制定依據(jù)

地方標(biāo)準(zhǔn)《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》（DB15/T 1939-2020）依據(jù)中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則—第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》（GB/T 1.1-2009）規(guī)則起草。

文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程起草工作

起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院。

主要起草人：張文軍、王美珍、黃衛(wèi)麗、寧?kù)o。

參考資料：

地方標(biāo)準(zhǔn)《文冠果組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程》（DB15/T 1939-2020）的制定，規(guī)范了文冠果組織培養(yǎng)的操作技術(shù)，有利于提高文冠果的無(wú)性繁殖效率，對(duì)內(nèi)蒙古自治區(qū)乃至全中國(guó)范圍內(nèi)文冠果組織培養(yǎng)技術(shù)研究具有重要的指導(dǎo)意義。

第一篇植物組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)理論

第一章植物組織培養(yǎng)概述1

一、植物組織培養(yǎng)發(fā)展歷程的簡(jiǎn)單回顧2

二、植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用前景6

三、植物組織培養(yǎng)有關(guān)的基本概念與基礎(chǔ)理論8

第二章植物組織培養(yǎng)所需的基本設(shè)備與條件11

一、化學(xué)藥品室11

二、配制培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室14

三、滅菌室15

四、接種室16

五、無(wú)菌培養(yǎng)室18

六、培養(yǎng)物的檢測(cè)與觀察記錄室19

七、基本儀器設(shè)備與用品20

第三章植物組織培養(yǎng)常用培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)基配制22

一、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分23

二、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分25

三、 碳水化合物26

四、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)27

五、瓊脂或其他支持物30

六、其他添加物32

七、培養(yǎng)基的選擇35

八、培養(yǎng)基的配制37

第四章無(wú)菌操作技術(shù)與設(shè)備42

一、干熱滅菌42

二、濕熱滅菌43

三、微波滅菌44

四、微過(guò)濾滅菌44

五、化學(xué)藥物滅菌45

六、 抗生素滅菌48

七、無(wú)菌操作中其他應(yīng)注意的問(wèn)題49

第五章再生植株的獲得51

一、愈傷組織51

二、愈傷組織的獲得52

三、再生植株的獲得56

四、 種質(zhì)材料的繼代71

第六章植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)72

一、根癌農(nóng)桿菌的特性及其轉(zhuǎn)基因機(jī)理73

二、 載體76

三、農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)化操作程序80

四、PCR技術(shù)86

五、PCR相關(guān)技術(shù)93

第七章植物組織培養(yǎng)與快速繁殖98

一、植物組織培養(yǎng)快繁的意義和過(guò)程98

（一）植物組織培養(yǎng)快繁的意義98

（二）植物組織培養(yǎng)快繁的過(guò)程99

二、植物組織培養(yǎng)快繁的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)102

（一）植物基因型、生理狀態(tài)和部位102

（二）外植體的大小103

（三）培養(yǎng)基104

三、快繁苗的健康狀況和遺傳穩(wěn)定性鑒定108

（一）病毒病鑒定方法108

（二）遺傳穩(wěn)定性鑒定108

四、植物快繁技術(shù)111

（一）植物莖尖組織培養(yǎng)脫毒快繁111

（二）胚狀體誘導(dǎo)、快繁111

（三）側(cè)芽原基誘導(dǎo)及快繁112

（四）不定芽誘導(dǎo)和快繁113

（五）脫毒苗木的速繁115

（六）愈傷組織誘導(dǎo)和分化116

（七）利用人工種子快繁116

五、幾種園藝、經(jīng)濟(jì)作物的快繁技術(shù)規(guī)程117

（一）馬鈴薯117

（二）大蒜117

（三）石刁柏119

（四）甘藍(lán)119

（五）結(jié)球萵苣（生菜）120

（六）花椰菜121

（七）生姜121

（八）草莓122

（九）香石竹122

（十）月季123

（十一）白鶴芋124

（十二）火鶴花124

（十三）文心蘭125

第二篇植物組織培養(yǎng)技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用

第八章植物脫毒技術(shù)126

一、危害植物的病毒種類126

二、植物感染病毒病后表現(xiàn)的主要癥狀127

三、植物感染病毒病后對(duì)其生長(zhǎng)和經(jīng)濟(jì)性狀的影響129

四、病毒傳染途徑130

五、病毒病的診斷與檢測(cè)方法131

六、血清學(xué)檢測(cè)方法與操作規(guī)程133

七、植物脫毒的意義及應(yīng)用前景136

（一）脫毒的重要性136

（二）脫毒的經(jīng)濟(jì)意義137

八、植物快繁脫毒技術(shù)的歷史及發(fā)展139

九、植物脫毒技術(shù)140

（一)通過(guò)熱處理消除病毒技術(shù)140

（二）植物莖尖組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)141

(三)莖尖培養(yǎng)結(jié)合熱處理脫毒145

（四）莖尖培養(yǎng)結(jié)合病毒鈍化劑處理脫毒145

十、幾種植物的病毒病、脫毒操作規(guī)程與檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)145

（一）馬鈴薯145

（二）大蒜150

（三）生姜158

（四）草莓164

（五）香石竹172

（六）大棗175

（七）脫毒梨的病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)175

（八）脫毒蘋果的病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)175

（九）脫毒蘭花種苗病毒檢測(cè)規(guī)程176

十一、脫毒操作與繁殖注意事項(xiàng)178

第九章植物組培苗的工廠化生產(chǎn)180

一、設(shè)施、設(shè)備180

(一)組織培養(yǎng)、離體快繁用設(shè)施和設(shè)備180

（二）保護(hù)栽培設(shè)施184

（三）試管苗移栽設(shè)施、設(shè)備194

二、工廠化生產(chǎn)的技術(shù)197

（一）品種選育和母株培育197

（二）離體快繁組培基本苗197

（三）組培苗的移栽馴化197

（四）苗木傳送和運(yùn)輸207

（五）苗木質(zhì)量檢測(cè)209

第十章組織培養(yǎng)快繁技術(shù)結(jié)合誘變育種210

一、應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)與誘變相結(jié)合進(jìn)行育種的意義和

研究進(jìn)展210

二、植物組織培養(yǎng)與誘變相結(jié)合技術(shù)212

三、用鈷60γ射線照射組培芽進(jìn)行誘變育種的實(shí)例214

（一）大蒜214

（二）香蕉217

（三）菊花218

第十一章植物種質(zhì)資源離體保存220

一、低溫保存220

二、超低溫保存222

三、植物離體保存的主要步驟225

四、幾種主要經(jīng)濟(jì)作物的離體保存技術(shù)226

（一）大蒜226

（二）鐵皮石斛229

（三）馬鈴薯230

（四）甘薯231

（五）百合232

（六）生姜233

（七）獼猴桃234

五、問(wèn)題與展望235

第三篇各論

第十二章藥用與保健用植物的組織培養(yǎng)與工廠化生產(chǎn)237

一、利用紅豆杉愈傷組織與細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)紫杉醇237

（一）實(shí)驗(yàn)材料238

（二）培養(yǎng)程序238

（三）紫杉醇含量的檢測(cè)240

二、人參細(xì)胞懸浮培養(yǎng)與工廠化生產(chǎn)241

（一）培養(yǎng)材料的選擇242

（二）培養(yǎng)基的選擇242

（三）接種及愈傷組織誘導(dǎo)244

三、紫草的組織培養(yǎng)與工廠化生產(chǎn)246

（一）材料的選擇247

（二）組織與細(xì)胞培養(yǎng)程序247

四、銀杏的組織培養(yǎng)與工廠化生產(chǎn)249

（一）取材與處理250

（二）愈傷組織誘導(dǎo)及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)250

五、桔梗的組織培養(yǎng)252

（一）材料及處理252

（二）培養(yǎng)程序253

六、仙人掌的組織培養(yǎng)與工廠化育苗255

（一）取材與消毒255

（二）接種與誘導(dǎo)256

（三）繼代與擴(kuò)繁257

（四）壯苗培養(yǎng)257

（五）生根與移栽257

七、木立蘆薈的組織培養(yǎng)258

（一）取材與消毒259

（二）接種與誘導(dǎo)芽的直接再生259

（三）芽的繼代與擴(kuò)繁260

（四）生根與移栽261

八、半夏的組織培養(yǎng)262

（一）取材與消毒處理262

（二）通過(guò)愈傷組織再生不定芽262

（三）誘導(dǎo)生根與移栽263

九、地黃的組織培養(yǎng)264

（一）取材與處理265

（二）接種與誘導(dǎo)芽的增殖265

（三）地黃的脫毒技術(shù)及病毒檢測(cè)267

十、大青葉的組織培養(yǎng)267

（一）取材與處理267

（二）接種與誘導(dǎo)芽增殖268

（三）生根與移栽269

十一、浙貝母的組織培養(yǎng)269

（一）配制誘導(dǎo)愈傷組織再生培養(yǎng)基270

（二）取材、消毒與培養(yǎng)270

（三）愈傷組織的誘導(dǎo)與保存271

（四）從愈傷組織誘導(dǎo)產(chǎn)生鱗莖和再生植株272

（五）壯苗、生根與移栽273

十二、龍膽的組織培養(yǎng)275

（一）實(shí)驗(yàn)材料275

（二）培養(yǎng)程序275

十三、羅漢果的組織培養(yǎng)279

（一）取材和處理279

（二）葉片培養(yǎng)誘導(dǎo)再生植株280

十四、甜葉菊的組織培養(yǎng)282

（一）種子的消毒與萌發(fā)培養(yǎng)282

（二）無(wú)菌種苗的莖尖和葉片培養(yǎng)282

十五、枸杞的組織培養(yǎng)284

（一）取材與消毒285

（二）莖段與葉片培養(yǎng)286

第十三章果樹(shù)、園林及觀賞植物的組織培養(yǎng)289

一、宮歧富士蘋果的葉片培養(yǎng)誘導(dǎo)植株再生289

（一）實(shí)驗(yàn)材料的選擇及意義289

（二）幼葉的獲取與培養(yǎng)289

二、中國(guó)櫻桃培養(yǎng)誘導(dǎo)植株再生291

（一）實(shí)驗(yàn)材料及處理291

（二）芽的培養(yǎng)與增殖291

三、杏的組織培養(yǎng)293

（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取與處理294

（二）誘導(dǎo)芽增殖的培養(yǎng)程序295

四、葡萄的組織培養(yǎng)297

（一）實(shí)驗(yàn)材料的選擇與催芽處理298

（二）芽的培養(yǎng)與誘導(dǎo)再生298

五、核桃的組織培養(yǎng)300

（一）種子萌發(fā)與實(shí)驗(yàn)材料選擇301

（二）建立高頻再生體系301

（三）防止核桃氧化褐變的措施304

六、懸鈴木葉片培養(yǎng)誘導(dǎo)再生植株305

（一）實(shí)驗(yàn)材料及處理305

（二）培養(yǎng)程序305

七、毛白楊組織培養(yǎng)與工廠化育苗307

（一）實(shí)驗(yàn)材料及處理308

（二）培養(yǎng)程序308

（三）工廠化育苗310

八、桉樹(shù)的組織培養(yǎng)311

（一）配制誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基313

（二）取材、消毒與接種314

（三）胚狀體的誘導(dǎo)與萌發(fā)315

（四）移栽或繼代培養(yǎng)316

九、泡桐的組織培養(yǎng)317

（一）實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備318

（二）誘導(dǎo)芽的再生培養(yǎng)程序319

十、黃柏的組織培養(yǎng)321

（一）實(shí)驗(yàn)材料322

（二）材料的培養(yǎng)與誘導(dǎo)再生322

十一、雪松的組織培養(yǎng)324

（一）實(shí)驗(yàn)材料及處理324

（二）接種與培養(yǎng)325

十二、蘭花的組織培養(yǎng)327

（一）取材和處理328

（二）接種與培養(yǎng)328

（三）關(guān)于蘭花合子胚培養(yǎng)問(wèn)題331

（四）蘭花組織培養(yǎng)的關(guān)鍵問(wèn)題331

十三、鳶尾的組織培養(yǎng)332

（一）材料及處理333

（二）分化培養(yǎng)基的配制與接種培養(yǎng)334

十四、杜鵑花的組織培養(yǎng)335

（一）取材與處理336

（二）配制培養(yǎng)基與接種幼芽337

（三）誘導(dǎo)生根與移栽338

（四）栽培與管理338

十五、紅掌的組織培養(yǎng)339

（一）取材和處理340

（二）接種與培養(yǎng)340

附錄343

一、常用英文縮略語(yǔ)343

二、常用植物生長(zhǎng)激素濃度單位換算表344

三、蒸汽壓力與蒸汽溫度對(duì)應(yīng)表345

主要參考書(shū)346 2100433B

楊凌金山農(nóng)業(yè)公司首席專家在1979年承擔(dān)的陜西省林業(yè)廳下達(dá)的“文冠果豐產(chǎn)良種選育”科技項(xiàng)目，經(jīng)過(guò)4年的選優(yōu)良種獲得成功并于1985年榮獲陜西省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)。陜西省《文冠果苗木、文冠果育苗技術(shù)規(guī)程》地方標(biāo)準(zhǔn)由楊凌金山農(nóng)業(yè)科技有限責(zé)任公司、陜西省林業(yè)研究中心、陜西省種苗站共同承擔(dān)制定 。

該公司科研人員成功培育出文冠果優(yōu)良品種——“文冠一號(hào)”，此品種的成功培育改良了野生文冠果所具有的弊端，具有早期豐產(chǎn)的特性，克服了野生品種座果率低、產(chǎn)量低，品質(zhì)差的弱點(diǎn)。

本書(shū)從理論和實(shí)踐兩個(gè)方面介紹了植物組織培養(yǎng)的基本理論、所需的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、實(shí)驗(yàn)技術(shù)及其原理，特別側(cè)重于實(shí)際的應(yīng)用技術(shù)，對(duì)研究中可能出現(xiàn)的問(wèn)題及其解決方法、注意事項(xiàng)等進(jìn)行了有針對(duì)性的敘述。全書(shū)分3篇，共13章，第一篇著重于基本理論的敘述并結(jié)合了部分實(shí)例；第二篇著重于實(shí)際應(yīng)用，重點(diǎn)介紹工廠化育苗的應(yīng)用，具有很好的使用指導(dǎo)價(jià)值；第三篇具體介紹多種藥用植物、園林綠化用植物的組織培養(yǎng)、快速繁育以及工廠化生產(chǎn)的操作規(guī)程，可作為從事此項(xiàng)工作的實(shí)例參考。

讀者對(duì)象：本書(shū)既可作為大專院校學(xué)生、碩士生教學(xué)與學(xué)習(xí)的基本教材，也可作為科研應(yīng)用單位、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中心、工廠化育苗公司等人員的實(shí)用參考書(shū)。