凝膠是一種多孔性的不帶表面電荷的物質(zhì),當(dāng)帶有多種成分的樣品溶液在凝膠內(nèi)運(yùn)動時,由于它們的分子量不同而表現(xiàn)出速度的快慢,在緩沖液洗脫時,分子量大的物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi),而在凝膠間幾乎是垂直的向下運(yùn)動,而分子量小的物質(zhì)則進(jìn)入凝膠孔內(nèi)進(jìn)行"繞道"運(yùn)行,這樣就可以按分子量的大小,先后流出凝膠柱,達(dá)到分離的目的。
根據(jù)層析物質(zhì)分子量的大小選擇不同型號的凝膠,如除鹽和除游離的熒光素,則可選用粗、中粒度的G28或G500,G250多用于分離蛋白質(zhì)單體,G200多用于分離蛋白質(zhì)凝膠聚合體等。
稱取適量的凝膠加入過量的緩沖液在冰箱(或室溫)中充分膨脹,或在沸水中煮,膨脹時間應(yīng)根據(jù)不同型號的凝膠而定()。
為使粒子均勻一致需進(jìn)行浮選,即加入凝膠粒子后,輕輕攪拌,靜置20min,傾去沉淀的粒子,如此反復(fù)數(shù)次即可。
層析柱的選擇一般根據(jù)分離樣品的種類和樣品的數(shù)量而定。純化蛋白質(zhì)時,柱床體積應(yīng)為樣品體積的25~100倍。去鹽、游離熒光素約為樣品體積的4~10倍。柱太短,影響分離效果。柱長一些,分離效果好,但柱太長,則延長分離時間,樣品也稀釋過度。層析柱的內(nèi)徑也要選擇適當(dāng)。內(nèi)徑過細(xì),會發(fā)生"器壁效應(yīng)",即靠近管壁的流速要大于中心的流速影響分離效果。所以層析柱的內(nèi)徑和高度應(yīng)有一定的比例。對于除鹽來說應(yīng)為1︰5~1︰25;對于純化蛋白質(zhì)來說應(yīng)為1︰20~1︰100。
裝柱過程基本同離子交換層析柱。
樣品體積不宜過多,最好為床體積的1%~5%,最多不要超過10%。樣品濃度也不宜過大,濃度過大粘度大,分離效果差,一般不超過4%。
洗脫液應(yīng)與膨脹一致,否則更換溶劑,凝膠體積會發(fā)生變化,影響分離效果。洗脫液要有一定的離子強(qiáng)度和pH值。分離血清蛋白常用0.02~0.1Mol/L pH 6.9~8.0的PBS液(0.14Mol/L NaCl)和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl緩沖鹽溶液(0.14Mol/L NaCl)。
同離子交換層析。
當(dāng)樣品的各組分全部洗脫下來之后,即可加入新的樣品,繼續(xù)使用。保存方法有三種:
⑴ 在液相中保存最方便,即于凝膠懸液中加入防腐劑(一般為0.02%N2N3或0.002%洗必泰)或高壓滅菌后4℃保存。此法至少可以保存半年以上。
⑵ 用完后,以水沖洗,然后用60%~70%酒精液沖洗,凝膠體積縮小,即在半收縮狀態(tài)下保存。
⑶ 長期不用者,最好以干燥狀態(tài)保存,即水洗凈后,用含乙醇的水洗,逐漸加大乙醇用量,最后用95%的乙醇洗,可全部去水,再用乙烯去除乙醇,抽濾干,于60℃~80℃干燥后保存。
分子篩又叫 稀土Y型分子篩 分子篩分很多型號 有3a分子篩4a分子篩5a分子篩等可以去南陽南召環(huán)宇分子篩廠看下詳細(xì)的介紹了
你用分子篩是不?用什么型號的?
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分子篩的知識 分子篩:分子篩是一類具有規(guī)則可調(diào)變均勻孔徑的多孔材料, 具有很大的比 表面積和孔容。對多種氣體有非常好的吸附性能。分子篩具有規(guī)整的孔道結(jié)構(gòu), 已被作為催化材料、 氣體分離與吸附劑、 離子交換劑等廣泛用于石油與天然氣加 工、精細(xì)化工、環(huán)保與核廢料處理等領(lǐng)域。具有更好的熱穩(wěn)定性和水熱穩(wěn)定性。 在工業(yè)上,孔隙率高且通常用于氣體或蒸氣混合物分離的吸附劑主要有沸石分子 篩、活性炭、活性粘土、硅膠及插性氧化鋁。 沸石:是一種是一種離子型極性吸附劑,孑 L隙結(jié)構(gòu)規(guī)整,孔道表面高度極 化。其成分為含有水架狀結(jié)構(gòu)的鋁硅酸鹽類, 其晶體結(jié)構(gòu)中有眾多的空腔, 并有 孔道將這些孔道聯(lián)通。 在未處理前, 孔道中常含有結(jié)合水, 加熱可使水分脫出并 且不破壞孔道結(jié)構(gòu)。經(jīng)過加熱脫水后,便形成了大量的空腔。 沸石分子篩 :沸石分子篩是結(jié)晶硅鋁酸鹽, 以其規(guī)整的晶體結(jié)構(gòu)、 均勻一致 的孔分布和可調(diào)變的表面性質(zhì)在
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1 概述 1.1 設(shè)計要求 原料氣壓力為 4.5MPa,溫度 30℃,工藝流程要求脫水后含水量在 1ppm以下(質(zhì)), 采用球形 4A 分子篩吸附脫水,已知 4A 分子篩的顆粒直徑為 3.2mm,堆密度為 660kg/m 3 ,吸附周期采用 8小時。 其具體內(nèi)容如下: 1. 繪制天然氣脫水工藝流程圖; 2. 確定工藝流程的主要工藝參數(shù); 3. 對脫水系統(tǒng)中主要設(shè)備進(jìn)行工藝計算,并確定主要設(shè)備的結(jié)構(gòu)尺寸和型號。 4. 確定流程中主要管線的規(guī)格(材質(zhì)、壁厚、直徑)。 5. 編寫工程設(shè)計書。 1.2 設(shè)計范圍 分子篩吸附塔裝置 導(dǎo)熱油換熱單元 過濾器 再生氣分離器 連接管道 排污放空系統(tǒng) 安全閥,調(diào)壓閥 1.3 設(shè)計原則 1) 貫徹國家建設(shè)基本方針政策,遵循國家和行業(yè)的各項技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范。 2) 貫徹“安全、可靠”的指導(dǎo)思想,緊密結(jié)合上、下游工程,以保證中央處理廠 安全、穩(wěn)定地運(yùn)行。 3) 根據(jù)
SEC指的是尺寸排阻層析。
, SEC,又稱凝膠過濾層析(Gel Filtration Chromatography,GFC)
凝膠滲透層析(Gel Permeation Chromatography,GPC)
分子篩層析(Molecular Sieve Chromatography,MSC)
在高效液相色譜分析中,用GFC或SEC表示凝膠過濾色譜或尺寸排阻色譜,流動相通常是水溶液;在有機(jī)高分子分析中,常用GPC表示凝膠滲透色譜,流動相通常是有機(jī)溶劑;在蛋白質(zhì)分離純化中用GFC或SEC表示凝膠過濾層析或尺寸排阻層析;本文以下內(nèi)容均針對蛋白質(zhì)分離,因此均以凝膠過濾層析(GFC)表示。
分離機(jī)理
填料是由高分子交聯(lián)而成、內(nèi)部具有網(wǎng)狀篩孔的固體顆粒,利用球狀凝膠內(nèi)的篩孔的大小,不同水力學(xué)半徑的分子在通過填料時運(yùn)行路徑存在差異,利用該差異將不同大小的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離。
蛋白質(zhì)分子流過填充凝膠的管柱時,大分子無法進(jìn)入凝膠篩孔,而只流經(jīng)凝膠及管柱間的孔隙,因此總體運(yùn)行路徑較短,從層析柱入口到出口所需時間較短;較小的分子因為進(jìn)入凝膠內(nèi)的篩孔,總體運(yùn)行路徑較長,故在管柱內(nèi)的停留時間較長;基于此原理可以區(qū)分大小不同的分子,亦可與已知大小的分子作比較而確定未知樣品的分子量。
球形蛋白與線性分子在凝膠過濾層析中的保留行為存在差異,因此使用球形蛋白制作的分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線不能用于明膠多肽、淀粉或其它聚合物。2100433B
凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析。是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用,根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì),多是交聯(lián)的聚糖(如葡聚糖或瓊脂糖)類物質(zhì),小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部,流下時路程較長,而大分子物質(zhì)卻被排除在外部,下來的路程短,當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時,溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開了。
凝膠是一種多孔性的不帶表面電荷的物質(zhì),當(dāng)帶有多種成分的樣品溶液在凝膠內(nèi)運(yùn)動時,由于它們的分子量不同而表現(xiàn)出速度的快慢,在緩沖液洗脫時,分子量大的物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠孔內(nèi),而在凝膠間幾乎是垂直的向下運(yùn)動,而分子量小的物質(zhì)則進(jìn)入凝膠孔內(nèi)進(jìn)行“繞道”運(yùn)行,這樣就可以按分子量的大小,先后流出凝膠柱,達(dá)到分離的目的。
凝膠層析是按照蛋白質(zhì)分子量大小進(jìn)行分離的技術(shù),又稱之凝膠過濾,分子篩層析或排阻層析。單個凝膠珠本身象個"篩子"。不同類型凝膠的篩孔的大小不同。如果將這樣的凝膠裝入一個足夠長的柱子中,作成一個凝膠柱。當(dāng)含有大小不同的蛋白質(zhì)樣品加到凝膠柱上時,比凝膠珠平均孔徑小的蛋白質(zhì)就要連續(xù)不斷地穿入珠子的內(nèi)部,這樣的小分子不但其運(yùn)動路程長,而且受到來自凝膠珠內(nèi)部的阻力也很大,所以越小的蛋白質(zhì),把它們從柱子上洗脫下來所花費(fèi)的時間越長。凝膠中只有很少的孔徑可接受大的蛋白。因此,大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠珠之間的縫隙首先被洗脫下來。凝膠過濾所用的凝膠孔徑大小的選擇主要取決于要純化的蛋白質(zhì)分子量。